細(xì)胞實(shí)驗(yàn)步驟：

一、細(xì)胞復(fù)蘇

1.將10ml移液管、移液槍、1ml槍頭、50ml離心管、T25培養(yǎng)瓶、酒精燈、廢液缸等物品放入超凈工作臺(tái)，紫外燈照射30min后再通風(fēng)30min；

2.預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

4.將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出；

5.放入一次性手套于37℃水浴鍋中快速晃動(dòng)使其融化；

6.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

7.吸取9ml培養(yǎng)基到50ml離心管中；

8.用1ml槍頭吸取解凍的細(xì)胞懸液于離心管中；

9.1000r/min,離心5min；

10.用75%酒精消毒后放入超凈工作臺(tái)；

11.吸棄上清液；

12.吸取1ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使細(xì)胞分布均勻，并做好標(biāo)記；

13.在顯微鏡下觀察復(fù)蘇的細(xì)胞密度及狀態(tài)；

14.將細(xì)胞放回二氧化碳培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

商品屬性：

產(chǎn)品介紹

A-427 細(xì)胞培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產(chǎn)品可保持A-427 細(xì)胞最佳的生長狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含 A-427 細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于A-427 細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

MEM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基                                              440 mL

特級(jí)胎牛血清                                                    50 mL

MEM NEAA非必需氨基1*125ML/500ML

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；?

注意事項(xiàng)：

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對(duì)人體健康有害的物質(zhì)，請(qǐng)不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

?細(xì)胞復(fù)蘇?：

從液氮罐中取出凍存細(xì)胞，迅速放入37℃水浴中解凍。

解凍后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，輕輕搖動(dòng)使細(xì)胞均勻分布。

放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞換液?：

吸除或倒掉培養(yǎng)皿內(nèi)的舊培養(yǎng)液。

加入PBS緩沖液，輕輕漂洗細(xì)胞，以去除懸浮在細(xì)胞表面的碎片，重復(fù)幾次。

加入新的培養(yǎng)基。

?細(xì)胞傳代?：

當(dāng)細(xì)胞長到80%~90%時(shí)，進(jìn)行傳代。

吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加入PBS緩沖液漂洗。

加入消化液，輕輕搖動(dòng)使消化液流遍所有細(xì)胞表面。

將培養(yǎng)瓶放入37℃培養(yǎng)箱中靜止幾分鐘，觀察細(xì)胞變化。當(dāng)細(xì)胞間隙增大后，加入含有血清的培養(yǎng)液終止消化。

吹打細(xì)胞使其成為懸液，轉(zhuǎn)移到離心管中離心。

棄上清，加入適量的細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

按比例分裝到新的培養(yǎng)皿中，補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基。

做好標(biāo)記，放入37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?細(xì)胞凍存?：

選擇對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行凍存。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到離心管中離心，棄上清。

加入適量的凍存液（如90%的培養(yǎng)基+10%的DMSO），輕輕吹打重懸細(xì)胞。

將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中，標(biāo)記后放入程序降溫盒，再放入-80℃冰箱凍存。幾小時(shí)后或過夜轉(zhuǎn)至液氮罐保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠抗受體(A)ELISA pcr檢測試劑盒

Human heat shock protein 27 (HSP-27) ELISA Kit 人熱休克蛋白27(HSP-27)試劑盒

Humanfreehaemoglobin,f-HbELISAKit 人游離血紅蛋白(f-Hb)pcr檢測試劑盒分裝

HumanAngiogenin,ANG試劑盒人血管生長素(ANG)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物非蛋白/游離巰基含量熒光定量試劑盒20次

MacrobrachiumrosenbergiiNodavirus,MrNVELISAKit羅氏沼蝦諾達(dá)病毒(MrNV)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠層粘蛋白α1(LAMA1)試劑盒 ，英文名： LAMA1 ELISA Kit

Mouse N- acetyl beta -D- Glucosaminidase (NAG) ELISA Kit 小鼠N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)試劑盒

ELISA 小鼠(mouse Cytochrome C) 分裝

CLIAKitforLCA/CD45(Humanleukocytecommonaigen)ELISAKit人白細(xì)胞共同抗原

通用型RNA酶保護(hù)法試劑盒5次

ELISAKitE-Selectin/CD62E猴E選擇素

小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)試劑盒

小鼠骨成型蛋白4(BMP-4)試劑盒

小鼠骨成型蛋白2(BMP-2)試劑盒

小鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)試劑盒

PE標(biāo)記人CD81單克隆抗體

肌球蛋白10抗體

ENSA重組人 ENSA / Endosulfine alpha 蛋白 Protein

SOD2 (superoxide-dimutase-2 0.5mlSOD2 (superoxide-dimutase-2) 超氧化物歧化酶2抗原

DDR1重組人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 Protein

DRAXIN Protein Human 重組人 DRAXIN 蛋白

PDGFRA Protein Human 重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白

A-427 細(xì)胞專用培養(yǎng)基SOD2 (superoxide-dimutase-2 0.5mlSOD2 (superoxide-dimutase-2) 超氧化物歧化酶2抗原

DRAXIN Protein Human 重組人 DRAXIN 蛋白

ENSA重組人 ENSA / Endosulfine alpha 蛋白 Protein

PDGFRA Protein Human 重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白

DDR1重組人 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 蛋白 Protein